Chronic Cystoisospora belli infection in a Colombian patient living with HIV and poor adherence to highly active antiretroviral therapy / Infección crónica por Cystoisospora belli en un paciente colombiano con HIV y cumplimiento deficiente de la terapia antirretroviral de gran actividad

Abstract | Cystoisospora belli is an intestinal Apicomplexan parasite associated with diarrheal illness and disseminated infections in humans, mainly immunocompromised individuals such as those living with the human immunodeficiency virus (HIV) or acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). An irregular administration of highly active antiretroviral therapy (HAART) in HIV patients may increase the risk of opportunistic infections like cystoisosporiasis. We describe here a case of C. belli infection in a Colombian HIV patient with chronic gastrointestinal syndrome and poor adherence to HAART. His clinical and parasitological cure was achieved with trimethoprim-sulfamethoxazole treatment. Although a reduction in the number of C. belli cases has been observed since the use of HAART, this parasite still has to be considered as a differential diagnosis of diarrheal disease in HIV/AIDS patients. Effective interventions enhancing adherence to HAART should be included in HIV patient care programs.

Resumen | Cystoisospora belli es un parásito intestinal del filo Apicomplexa asociado con enfermedades diarreicas e infecciones diseminadas en humanos, principalmente en individuos inmunocomprometidos, como aquellos infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) o el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (sida). El cumplimiento inadecuado de la terapia antirretroviral de gran actividad (TARGA) puede aumentar el riego de infecciones oportunistas, incluida la cistoisosporiasis. Se describe el caso de infección por C. belli en un paciente colombiano con HIV, que presentó un síndrome gastrointestinal crónico e incumplía el tratamiento con la TARGA. Después del diagnóstico parasitológico, el paciente fue tratado con trimetoprim-sulfametoxazol, lográndose la recuperación clínica y la cura parasitológica. Aunque se ha observado una reducción en el número de casos de C. belli desde la implementación de la TARGA, este parásito aún debe considerarse en el diagnóstico diferencial de las enfermedades diarreicas en pacientes con HIV/sida. Los programas de atención deben incluir intervenciones efectivas que potencien el cumplimiento de la TARGA en estos pacientes.

Genetic diversity of Hepatozoon spp. in rodents from Chile / Diversidade genética de Hepatozoon spp. em roedores do Chile

Abstract This study aimed to investigate the genetic diversity of Hepatozoon spp. in rodents from Valdivia, Chile. A total of 74 rodents (synanthropic n=38; wild n=36) were trapped in Valdivia. We performed conventional PCR assays for Apicomplexa organisms targeting two overlapping 18S rDNA gene fragments (600 bp and 900 bp) followed by sequencing of selected amplicons. Hepatozoon spp. occurrence was 82.43% (61/74). Twelve sequences obtained from the 600 bp and ten from the 900 bp 18S rDNA fragments were identified as Hepatozoon sp. Six sequences obtained from 18S rDNA-based overlapping PCR protocols were used for concatenated (1,400 bp) phylogenetic, haplotype and distance analyses. Hepatozoon spp. 18S rDNA concatenated sequences from the present study were detected in Oligoryzomys longicaudatus, Rattus norvegicus, Mus musculus, and Abrothrix longipilis grouped with Hepatozoon species earlier described in rodents and reptiles from Chile and Brazil. Nucleotide polymorphism of the six 18S rDNA sequences (1,400 bp) from this study, and other Chilean sequences from rodents and rodent's ticks, showed high diversity with a total of nine Chilean haplotypes. Three haplotypes from Valdivia were identified for the first time in this study, suggesting the circulation of novel haplotypes in rodents from southern Chile.

Resumo Este estudo teve como objetivo investigar a diversidade genética de Hepatozoon spp. em roedores de Valdivia, Chile. Um total de 74 roedores (sinantrópicos n=38; selvagens n=36) foram capturados. PCR convencional foi realizada para organismos Apicomplexa, visando dois fragmentos sobrepostos do gene 18S rDNA (600 bp e 900 bp), seguida pelo sequenciamento de amplicons selecionados. A ocorrência de Hepatozoon spp. foi de 82,43% (61/74). Doze sequências obtidas dos fragmentos de 18S rDNA de 600 pb e dez dos fragmentos de 18S rDNA de 900 pb foram identificadas como Hepatozoon sp. Seis sequências obtidas, a partir de protocolos de PCR sobrepostos, foram usadas para análises filogenéticas (1.400 bp), de haplótipos e de distância. Sequências concatenadas 18S rDNA do presente estudo foram detectadas em Oligoryzomys longicaudatus, Rattus norvegicus, Mus musculus e Abrothrix longipilis e agrupadas com Hepatozoon descrito em roedores e répteis do Chile e do Brasil. A análise de polimorfismos das seis sequências deste estudo, junto com outras sequências chilenas de roedores e carrapatos de roedores, mostrou alta diversidade com um total de nove haplótipos no Chile. Três haplótipos detectados em Valdivia foram identificados pela primeira vez neste estudo, sugerindo que novos haplótipos circulam em roedores do sul do Chile.

Molecular detection of Apicomplexa protozoa in tissues from Alouatta guariba clamitans / Detecção molecular de protozoários Apicomplexa em tecidos de Alouatta guariba clamitans

The brown howler monkey (Alouatta guariba clamitans) is a primate species widely distributed in South America. Infections by protozoa are common in primates. However, studies on protozoa in primates in Brazil are scarce, so the goal of this study was to investigate DNA from the apicomplexan protozoa Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in tissues of A. guariba clamitans. DNA extraction was performed on tissue samples from the heart, brain, liver, spleen, lung and intestine of six A. guariba clamitans from Santa Maria, Central Region of Rio Grande do Sul, Brazil. Conventional PCR was performed using 18S rRNA gene general primers for Apicomplexa and also specific primers to amplify Neosporaspp. and Toxoplasma gondii DNA. All animals were positive in the 18S PCR and the genetic sequencing confirmed the presence of Sarcocystis spp. DNA in the tissues of four animals belonging to at least two species (S. neurona and S. gigantea) and T. gondii DNA in the other two animals. One positive sample for T. gondii was genotypically characterized as atypical by the restriction fragment length polymorphism technique. N. caninum DNA was not detected in the tested samples. The presence of Apicomplexa protozoan DNA in the tissues of the six animals tested in this study highlights the importance of howler monkeys as maintainers of these pathogens in nature.(AU)

O bugio ruivo (Alouatta guariba clamitans) é uma espécie de primata amplamente distribuída na América do Sul. As infecções por protozoários são comuns em primatas. Entretanto, estudos sobre protozoários em primatas no Brasil são escassos, portanto o objetivo deste estudo foi pesquisar DNA dos protozoários Apicomplexa Neospora caninum, Sarcocystisspp. e Toxoplasma gondii em tecidos de A. guariba clamitans. A extração de DNA foi realizada em amostras de tecido do coração, cérebro, fígado, baço, pulmão e intestino de seis A. guariba clamitans oriundos de Santa Maria, Região Central do Rio Grande do Sul, Brasil. Foi realizada PCR convencional utilizando primers geral do gene 18S rRNA para Apicomplexa e também primers específicos para amplificação de DNA de Neospora spp.e Toxoplasma gondii. Todos os animais foram positivos no PCR geral para Apicomplexa e no sequenciamento genético confirmou-se a presença de DNA de Sarcocystis nos tecidos de quatro animais pertencentes a pelo menos duas espécies (S. neurona e S. gigantea), e DNA de T. gondii foi detectado nos outros dois animais. Uma amostra positiva para T. gondii foi caracterizada genotipicamente como atípico pela técnica de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição. Não foi detectado DNA de N. caninum nas amostras testadas. A presença de DNA de protozoários apicomplexa nos tecidos dos seis animais testados neste estudo destaca a importância dos bugios ruivos como mantenedores desses patógenos na natureza.(AU)

Molecular detection of Apicomplexa protozoa in tissues from Alouatta guariba clamitans

ABSTRACT: The brown howler monkey (Alouatta guariba clamitans) is a primate species widely distributed in South America. Infections by protozoa are common in primates. However, studies on protozoa in primates in Brazil are scarce, so the goal of this study was to investigate DNA from the apicomplexan protozoa Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in tissues of A. guariba clamitans. DNA extraction was performed on tissue samples from the heart, brain, liver, spleen, lung and intestine of six A. guariba clamitans from Santa Maria, Central Region of Rio Grande do Sul, Brazil. Conventional PCR was performed using 18S rRNA gene general primers for Apicomplexa and also specific primers to amplify Neosporaspp. and Toxoplasma gondii DNA. All animals were positive in the 18S PCR and the genetic sequencing confirmed the presence of Sarcocystis spp. DNA in the tissues of four animals belonging to at least two species (S. neurona and S. gigantea) and T. gondii DNA in the other two animals. One positive sample for T. gondii was genotypically characterized as atypical by the restriction fragment length polymorphism technique. N. caninum DNA was not detected in the tested samples. The presence of Apicomplexa protozoan DNA in the tissues of the six animals tested in this study highlights the importance of howler monkeys as maintainers of these pathogens in nature.

RESUMO: O bugio ruivo (Alouatta guariba clamitans) é uma espécie de primata amplamente distribuída na América do Sul. As infecções por protozoários são comuns em primatas. Entretanto, estudos sobre protozoários em primatas no Brasil são escassos, portanto o objetivo deste estudo foi pesquisar DNA dos protozoários Apicomplexa Neospora caninum, Sarcocystisspp. e Toxoplasma gondii em tecidos de A. guariba clamitans. A extração de DNA foi realizada em amostras de tecido do coração, cérebro, fígado, baço, pulmão e intestino de seis A. guariba clamitans oriundos de Santa Maria, Região Central do Rio Grande do Sul, Brasil. Foi realizada PCR convencional utilizando primers geral do gene 18S rRNA para Apicomplexa e também primers específicos para amplificação de DNA de Neospora spp.e Toxoplasma gondii. Todos os animais foram positivos no PCR geral para Apicomplexa e no sequenciamento genético confirmou-se a presença de DNA de Sarcocystis nos tecidos de quatro animais pertencentes a pelo menos duas espécies (S. neurona e S. gigantea), e DNA de T. gondii foi detectado nos outros dois animais. Uma amostra positiva para T. gondii foi caracterizada genotipicamente como atípico pela técnica de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição. Não foi detectado DNA de N. caninum nas amostras testadas. A presença de DNA de protozoários apicomplexa nos tecidos dos seis animais testados neste estudo destaca a importância dos bugios ruivos como mantenedores desses patógenos na natureza.

Survey of Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis neurona antibodies in wild red-tailed Amazon parrots (Amazona brasiliensis) / Pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora caninum e anti-Sarcocystis neurona em papagaios-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) de vida livre

Abstract Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis neurona are obligate intracellular parasites within the phylum Apicomplexa. The red-tailed Amazon parrot (Amazona brasiliensis) is a near-threatened species of psittacine that is endemic to the Atlantic Forest of Brazil and has been designated as a bioindicator because of its sensitivity to environmental qualitative status and changes. The aim of this study was to evaluate the presence of antibodies against T. gondii, N. caninum and S. neurona in wild red-tailed Amazon parrot nestlings on Rasa Island, Brazil. Blood samples were collected from 51 parrots and plasma samples were stored at - 20 °C until immunofluorescence antibody tests (IFAT) were performed. Antigen slides were prepared using tachyzoites of T. gondii (RH strain) and, N. caninum (NC-1 strain) and using merozoites of S. neurona (SNR37 strain). Plasma samples were tested at initial dilutions of 1:16 for T. gondii, 1:50 for N. caninum and 1:5 for S. neurona. An anti-chicken antibody conjugated with FITC was used as a secondary antibody at 1:50 dilution. No antibodies for any of these three protozoa were found, thus suggesting that these wild red-tailed Amazon parrot nestlings had not been exposed to these parasites.

Resumo Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis neurona são protozoários intracelulares do filo Apicomplexa. O papagaio-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) é um psitacídeo endêmico da floresta atlântica, considerado uma espécie quase ameaçada de extinção e bioindicadora por sua sensibilidade às mudanças no ambiente. O objetivo do presente estudo foi detectar a presença de anticorpos contra T. gondii, N. caninum e S. neurona em filhotes de papagaios-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) de vida livre na Ilha Rasa, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 51 papagaios e armazenadas a - 20ºC até a realização da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). As lâminas de RIFI com os antígenos, foram preparadas com taquizoítos de T. gondii (cepa RH) e N. caninum (cepa NC-1) e com merozoítos de S. neurona (cepa SNR37). Os plasmas foram diluídos em PBS (Ph 7,2) nas diluições 1:16 para T. gondii, 1:50 para N. caninum e 1:5 para S. neurona. O conjugado anti-IgG de galinhas marcado com fluoresceína (FITC) foi utilizado na diluição de 1:50. Não foram detectados anticorpos para os três protozoários nas amostras sugerindo que os filhotes de papagaios-de-cara-roxa não foram expostos aos protozoários.

Protection against Toxoplasma gondii cysts in pigs immunized with rROP2 plus Iscomatrix / Proteção contra cistos de Toxoplasma gondii em suínos imunizados com rROP2 associado à Iscomatrix

Abstract This study aimed to evaluate the humoral immune response in pigs immunized intranasally and intramuscularly with recombinant Toxoplasma gondii rROP2 protein in combination with the adjuvant Iscomatrix. Twelve mixed breed pigs divided into three groups (n=4) were used, G1 received recombinant ROP2 proteins (200 µg/dose) plus Iscomatrix, G2 received PBS plus Iscomatrix, and G3 as the control group. The intranasal (IN) and intramuscular (IM) routes were used. Animals were challenged orally with VEG strain oocysts and treated on day three after challenge. Fever, anorexia, and prostration were the clinical signs observed in all animals. All the G1 animals produced antibodies above the cut-off on the day of the challenge, while the G2 and G3 remained below the cut-off. Better partial protection against parasitemia and cyst tissue formation was observed in G1 than G3. The protection factors against tissue cyst formation were 40.0% and 6.1% for G1 and G2, respectively, compared to G3. In conclusion, there were not systemic antibody responses in pigs with IN immunization with rROP2+Iscomatrix; however, after IM immunization, those animals produced higher titers than animal controls. We associated these results with partial protection obtained against parasitemia and tissue cysts formation.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imune humoral em suínos imunizados pelas vias intranasal e intramuscular com proteínas recombinantes rROP2 do Toxoplasma gondii associadas ao adjuvante Iscomatrix. Doze suínos cruzados divididos em 3 grupos (n=4) foram utilizados. O G1 recebeu proteína recombinante ROP2 (200mg/dose) associada ao adjuvante Iscomatrix; o G2 recebeu PBS associado ao Iscomatrix; e o G3 foi o grupo controle. As vias intranasal (IN) e intramuscular (IM) foram utilizadas. Os animais foram desafiados por via oral com a cepa VEG e tratados no dia três após o desafio. Febre, anorexia e prostração foram os sinais clínicos observados em todos os animais. Todos os animais do G1 produziram anticorpos acima do ponto de corte no dia do desafio, enquanto os animais do G2 e G3 permaneceram abaixo do ponto de corte no desafio. Proteção parcial contra parasitemia e formação de cistos teciduais foram observadas nos suínos do G1 comparados ao G3. Os fatores de proteção contra a formação de cistos teciduais foram 40,0% e 6,1% no G1 e G2, respectivamente, comparados com o G3. Como conclusão, não houve estimulação da resposta imune humoral sistêmica nos suínos após as imunizações IN com rROP2+Iscomatrix. Estes animais, porém, após a imunização IM, produziram títulos de anticorpos mais altos que os animais controles. Esses resultados foram associados a uma proteção parcial contra a parasitemia e formação de cistos teciduais.

Mixosporídeos e nematóides em Hemiodopsis microlepis (Teleostei: Hemiodontidae) do rio Gurguéia-Bom Jesus-Pi, Brasil / Myxosporids and nematodes in Hemiodopsis microlepis (Teleostei: Hemiodontidae) of the Gurguéia River, Bom Jesus-Piauí, Brazil / Myxospóridos y nematodos en Hemidopsis microlepsis (Teleostei: Hemiodontidae) del río Gurguéia, Bom Jesús-Pi, Brasil

Resumo O objetivo deste estudo foi realizar um estudo ictioparasitológico sobre a espécie Hemiodopsis microlepis (peixes de arqueiros), do rio Gurguéia, situada em Bom Jesus-Piauí, Brasil. Coletaram-se trinta espécimenes de Hemiodopsis microlepis, aos quais realizou-se uma análise morfológico externo e coleta de pequenos fragmentos das branquias, fígado, rins e intestinos para identificar os parasitas Myxobolus sp., Henneguya sp. e Camallanus sp. em um microscópio óptico (40X). Aproximadamente 90 % dos peixes examinados foram parasitados por myxosporidos pertencentes à família Myxobolidae, dos quais ao redor do 20 % foram parasitados por Henneguya sp. e o 70 % foram parasitados por Myxobolus sp. Solo o 5% das espécimenes parasitados por Myxobolus sp. foram também parasitados por nematódeos. O estudo de ictioparasitologia realizado sobre a espécie Hemiodopsis microlepis confirmou a presença de parasitas Myxobolus sp. e Henneguya e os nematódeos da espécie Camallanus sp.

Abstract The objective of this study was to carry out an ichthyoparasitological study on the species Hemiodopsis microlepis (archerfish) of the Gurguéia River, located in Bom Jesus Piauí, Brazil. Thirty specimens of Hemiodopsis microlepis were collected, which underwent an external morphological analysis and collection of small fragments of gills, liver, kidneys, and intestines to identify the parasites Myxobolus sp., Henneguya sp., and Camallanus sp., using an optical microscope (40X). About 90% of the examined fish were parasitized by myxosporids belonging to the Myxobolidae family, of which around 20% were parasitized by Henneguya sp., and 70% were parasitized by Myxobolus sp. Only 5% of the specimens parasitized by Myxobolus sp. were also parasitized by nematodes. The ichthyoparasitological study of the species Hemiodopsis microlepis confirmed the presence of the parasites Myxobolus sp. and Henneguya sp., as well as the nematodes of the species Camallanus sp.

Resumen El objetivo de este estudio fue realizar un estudio ictioparasitológico sobre la especie Hemiodopsis microlepis (peces de arqueros), del río Gurguéia, situada en Bom Jesus-Piauí, Brasil. Se recolectaron treinta especímenes de Hemiodopsis microlepis, a los que se les realizó un análisis morfológico externo y recolección de pequeños fragmentos de las branquias, hígado, riñones e intestinos para identificar los parásitos Myxobolus sp., Henneguya sp. y Camallanus sp. en un microscopio óptico (40X). Alrededor del 90 % de los peces examinados fueron parasitados por myxosporidos pertenecientes a la familia Myxobolidae, de los cuales alrededor del 20 % fueron parasitados por Henneguya sp. y el 70 % fueron parasitados por Myxobolus sp. Solo el 5% de los especímenes parasitados por Myxobolus sp. fueron también parasitados por nematodos. El estudio ictioparasitológico realizado sobre la especie Hemiodopsis microlepis confirmó la presencia de parásitos Myxobolus sp. y Henneguya y los nematodos de la especie Camallanus sp.

Antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii detected in buffaloes from Rio Grande do Sul, Brazil / Anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii detectados em búfalos no Rio Grande do Sul

The presence of antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii was evaluated in buffaloes (Bubalus bubalis) from Rio Grande do Sul state (RS), southern Brazil. Serum samples (n=220) were analyzed for antibodies by indirect fluorescent antibody test (IFAT). Antibody presence was considered when the titers were equal or higher than 100 for these protozoa. A total of 60.5% (133/220) buffalo serum samples were positive for at least one of the protozoa evaluated in this study. Antibodies for N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii were found in 36.4% (80/220), 25.5% (56/220) and 16.8% (37/220) of the buffaloes respectively, indicating a higher frequency of N. caninum infection (p=0.0133). The IFAT is a suitable method to diagnose N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii infection in buffaloes for detecting IgG antibodies. This study demonstrates the presence of these three protozoa in buffalo herds in RS, Brazil, which may be source of infection to other animals. The high frequency of animals positive for N. caninum is important and could be related to reproductive problems. Additionally, the presence of Sarcocystis spp. and T. gondii in buffaloes can be a possible public health issue.(AU)

A presença de anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii foi avaliada em búfalos (Bubalus bubalis) no estado do Rio Grande do Sul (RS), Região Sul do Brasil. Amostras de soro de 220 bubalinos foi analisada para presença de anticorpos, através de reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram títulos de anticorpos maiores ou iguais a 100, para os protozoários estudados. Um total de 60,5% (133/220) das amostras sorológicas dos búfalos foram positivas para pelo menos um dos parasitas pesquisados. Anticorpos para N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii foram encontrados em 36,4% (80/220); 25,5% (56/220) e 16,8% (37/220) dos búfalos respectivamente, indicando que houve uma maior frequência de infecção de N. caninum em relação aos demais protozoários (p=0.0133). A RIFI é um método adequado para o diagnóstico sorológico da infecção por N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos. Este estudo demonstrou a presença destes três protozoários em bubalinos no RS, Brasil, que pode ser fonte de infecção para outros animais. A elevada ocorrência de animais positivos para N. caninum é importante e pode estar relacionada a problemas reprodutivos. Adicionalmente, a presença de Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos, pode significar um possível problema de saúde pública.(AU)

Natural Sarcocystis gigantea infection in sheep from Southern Brazil / Infecção natural por Sarcocystis gigantea em ovinos no Rio Grande do Sul

ABSTRACT: Protozoal diseases caused by species of Sarcocystiscan cause serious damage in sheep flocks, inducing decreased growth conversion rates and partial or complete loss of carcasses at the slaughterhouse. This article describes an outbreak of Sarcocystis giganteainfection in sheep slaughtered in a farm in Rio Grande do Sul State, Brazil. Between July and September 2013, three sheep showed multiple nodules in the esophagus that were microscopically characterized as encapsulated cysts filled with elongated, basophilic, nucleated structures morphologically consistent with S. giganteabradyzoites. Diagnosis was made based on the epidemiological, macroscopic, and microscopic findings. This is the first report of this infection in sheep in Rio Grande do Sul and should be recognized by veterinarians, especially during meat inspection.

RESUMO: Doenças causadas por protozoários do gênero Sarcocystispodem causar sérios prejuízos em rebanhos de ovinos, por induzirem retardo no crescimento e condenação parcial ou total das carcaças em abatedouro. O presente trabalho descreve a infecção natural por Sarcocystis giganteaem ovinos abatidos em uma propriedade rural no Rio grande do Sul. Entre julho e setembro de 2013, três ovinos apresentaram múltiplos nódulos no esôfago, os quais, microscopicamente, corresponderam a cistos circundados por cápsula rugosa, repletos de estruturas alongadas, basofílicas e nucleadas, morfologicamente compatíveis com bradizoítos de S. gigantea.Os dados epidemiológicos unidos aos achados macroscópicos e microscópicos permitiram o diagnóstico conclusivo. Esse foi o primeiro relato dessa infecção no Rio Grande Sul e deve ser reconhecida por veterinários de campo e especialmente no momento da inspeção das carcaças no abatedouro.

Seroepidemiology of Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii and Neospora spp. among horses in the south of the state of Minas Gerais, Brazil / Soroepidemiologia de Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii e Neospora spp. em Equinos no Sul do Estado de Minas Gerais, Brasil

Abstract The present study used the indirect fluorescent antibody test (IFAT) to determine the seroprevalence of Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii and Neospora spp., and evaluated the variables associated with these infections among 506 apparently healthy horses, reared in the south of the state of Minas Gerais, Brazil. This study was conducted between April 2012 and October 2013. Among the horses, the true prevalence of S. neurona was 26% (95% CI: 22.0-30.4%), T. gondii 19.9% (95% CI: 15.5-24.8%) and Neospora spp. 23.9% (95% CI: 19.9-28.1%); and among the farms, 88.3% (95% CI: 74.4-91.6%), 71.6% (95% CI: 41-92.8%) and 85% (95% CI: 70.7-96.1%), respectively. Regarding mixed infection, 17 horses (3.4%) were seropositive for both S. neurona and T. gondii, 16 (3.2%) for T. gondii and Neospora spp. and 14 (2.8%) for S. neurona and Neospora spp. The associations between seropositivity and variables relating to the structure of the farm, management and health were analyzed using the logistic regression analysis, through the generalized estimating equations (GEE). The results suggest that the south of Minas Gerais is an enzootic area for S. neurona, T. gondii and Neospora spp. among horses, with prevalence of asymptomatic subclinical or chronic infections.

Resumo Este estudo determinou, pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), a soroprevalência de Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii e Neospora spp., e avaliou as variáveis associadas com a infecção, em 506 equinos, aparentemente sadios, criados no Sul de Minas, Brasil. O estudo foi realizado no período de abril de 2012 a outubro de 2013. Entre equinos, a prevalência verdadeira para S. neurona foi de 26% (IC 95%= 22,0-30,4%); para T. gondii de 19,9% (IC 95%= 15,5-24,8%); e para Neospora spp. de 23,9% (IC 95%= 19,9-28,1%); e entre propriedades, 88,3% (IC 95%= 74,4-91,6%), 71,6% (IC 95% = 41-92,8%), e 85% (IC 95%= 70,7-96,1%), respectivamente. Em relação à infecção mista, 17 (3,4%) equinos foram soropositivos para S. neurona e T. gondii, 16 (3,2%) para T. gondii e Neospora spp., e 14 (2,8%) para S. neurona e Neospora spp. A associação entre soropositividade e variáveis relacionadas à estrutura da propriedade, manejo e sanidade, foi analisada, utilizando-se a análise de regressão logística estimada por Generalized Estimating Equations (GEE). Os resultados sugerem que o Sul de Minas é área enzoótica para S. neurona, T. gondii e Neospora spp. em equinos, com predomínio de infecções subclínicas ou crônicas, assintomáticas.

Neutrophil extracellular traps in the intestinal mucosa of Eimeria-infected animals

Objective: To investigate the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) in vivo by analysing intestinal sections from experimentally Eimeria bovis- and naturally Eimeria arloingi-infected animals. Methods: Intestinal samples of Eimeria arloingi- and Eimeria bovis-infected animals were analysed by using immunohistochemical and fluorescence approach by using monoclonal antibodies. Results: Classical NET components were confirmed by co-localization of extracellular DNA being decorated with neutrophil elastase and histones in Eimeria-infected tissue samples. Here, extrusion of NETs was exclusively detected in intestinal polymorphonuclear neutrophils infiltrating Eimeria-infected sites. In vivo NETs were either found in close proximity or in direct contact to different Eimeria stages suggesting a stage-independent process. NETs were also found within the gut lumen driven by polymorphonuclear neutrophils that were contacting released oocysts. Conclusions: We postulate that NETs might play an important role in innate defence reactions in coccidiosis therefore significantly altering the outcome of infection.

Investigação de anticorpos contra Sarcocystis neurona e Sarcocystis cruzi em equinos / Investigation of antibodies against Sarcocystis neurona and Sarcocystis cruzi in equines

Sarcocystis neurona is the primary agent for Equine Protozoal Myeloencephalitis (EPM), important neurological disease characterized by behavior or muscular changes, that impairs animal performance and husbandry. Sarcocystis cruzi is a pathogen related to myositis in cattle. Although related the life cycles of the parasites are distinct. S. neurona has opossums (Didelphis spp.) and S. cruzi, dogs as definitive hosts. However, S. neurona and S. cruzi may undergo cross-reactivity in serological tests, interfering on results of EPM ante-mortem diagnostic tests. In the present study, serology of 189 mares was performed by indirect immunofluorescence antibody test, using antigens of S. neurona and S. cruzi in order to assess the exposure degree of animals to antigens. Analyzing the results, it was observed that most of the animals (84.13%) reacted with at least one protozoal species and the number of animals which showed antibodies against S. cruzi was greater than S. neurona (80.42% and 33.86%, respectively) and a third of seropositive animals reacted to antigens of both species.(AU)

Isospora bocamontensis (Protozoa: Apicomplexa) in captive yellow cardinal Gubernatrix cristata (Passeriformes: Emberezidae) / Isospora bocamontensis (Protozoa: Apicomplexa) em cardeais-amarelo Gubernatrix cristata (Passeriformes: Emberezidae) mantidos em cativeiro

The yellow cardinal (Gubernatrix cristata) is a passerine found in southern Brazil, especially along the border with Uruguay and Argentina. It is an endangered species and its population is decreasing. Among the parasites that affect passerines, the genus Isospora is the most easily found in both captive and free-living birds. This parasite commonly causes injury to the intestinal tissue and could occasionally affect other organs. In this work we examined the occurrence of coccidiosis in captive yellow cardinals and its association with factors such as sex, use of parasiticides, type of enclosure, contact with feces, type of food and cleaning frequency. We collected fecal samples of 45 yellow cardinals, healthy and kept in captivity, in late afternoon at the end of the reproductive period. The examination showed parasitic infection by Isospora bocamontensis in 44.5% of the birds. This infection is not influenced by the sex of birds, but is significantly affected by the type of enclosure, contact with the feces, use of parasiticides, type of food and cleaning frequency. The results indicate that to keep yellow cardinals captive, these factors must be observed.

O cardeal-amarelo (Gubernatrix cristata) é um pássaro que ocorre no sul do Brasil, principalmente na fronteira com Uruguai e Argentina. É uma ave ameaçada de extinção e sua população está decrescendo. Dentre, os parasitas que afetam a ordem Passeriformes, o gênero Isospora está entre o mais encontrado, tanto em aves de cativeiro quanto em aves de vida-livre. Comumente causam injúrias no tecido intestinal, podendo ocasionalmente afetar outros órgãos. Neste trabalho examinamos a ocorrência de coccidiose em cardeais mantidos em cativeiro e verificamos sua associação com fatores como sexo, uso de produtos parasiticidas, tipo de recinto, contato com fezes, tipo de alimentação e frequência de limpeza. Foram coletadas amostras de fezes, ao entardecer, de 45 cardeais-amarelos, hígidos, mantidos em cativeiro, no final do período reprodutivo. O exame coproparasitológico revelou infecção parasitária por Isospora bocamontensis, em 44,5% das aves. Esta infecção não é influenciada pelo sexo das aves, mas é significativamente afetada pelo tipo de recinto, contato com as fezes, uso de parasiticidas, tipo de alimentação e frequência de limpeza. Indicando que para a manutenção em cativeiro estes fatores devem ser observados.

Screening for Toxoplasma gondii in aborted bovine fetuses in Brazil / Pesquisa de Toxoplasma gondii em fetos bovinos abortados no Brasil

The aim of this study was to determine if Toxoplasma gondii was present in aborted bovine fetuses in Brazil. Histopathology of 105 cases with suspected infectious abortion, analyzed during the period from 2006 to 2008 at Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Sanidade Animal of Instituto Biológico, São Paulo, showed 75 cases with indications of abortion due to apicomplexan protozoa. These cases were submitted to PCR for verification of the laboratory diagnosis. Fetal DNA was extracted from central nervous system, heart, liver, muscle, and/or placenta samples to obtain a 529 bp DNA fragment. T. gondii DNA was not detected in any of the bovine fetuses analyzed, suggesting that it may not be a frequent cause of bovine abortion.

Pesquisa de toxoplasma gondii em fetos bovinos abortados no Brasil. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a presença de Toxoplasma gondii em fetos bovinos abortados no Brasil. Com base em laudos histopatológicos, de um total de 105 casos com suspeita de aborto infeccioso, recebidos no período de 2006 a 2008, no Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Sanidade Animal do Instituto Biológico, São Paulo, 75 casos foram sugestivos de abortamento por protozoário Apicomplexa e foram submetidos à técnica de PCR para confirmação do diagnóstico laboratorial. O DNA foi extraído a partir de amostras de sistema nervoso central, coração, músculo, fígado e/ou placenta dos fetos para obtenção de um fragmento de DNA de 529pb. Não foi detectada a presença de DNA de T. gondii em qualquer dos fetos bovinos analisados, não sendo este agente infeccioso uma causa frequente de abortamentos.

Eimeria pavoaegyptica sp. nov. (Apicomplexa: Eimeriidae) in faeces of Indian peacocks, Pavo cristatus Linnaeus, 1758 (Galliformes: Phasianidae) from Egypt

Coprological examination of 15 Indian peacocks, Pavo cristatus, revealed the presence of a coccidium species of the genus Eimeria, which apparently represents a previously undescribed species. Sporulation is exogenous and fully developed oocysts of Eimeria pavoaegyptica sp. nov. are ellipsoidal, with a dimension of 15 (13-16) × 12 (10-12.9) μm and with a shape index of 1.25 (1-1.3). The sporulated oocysts have no micropyle but enclose one large rectangular-shaped polar granule and an oocyst residuum. The oocysts have a distinct two-layered wall, which is ~1.7 μm thick. The outer layer has a smooth texture; it fills ~¾ of the total thickness and appears bicolored. The sporocysts are boat-shaped, of about 10 (9-11) × 4 (4-4.7) μm; their average shape-index is 2.5 μm with a small pointed Stieda body and a smooth, thin single-layered wall. No substieda body is detected. The sporocysts contain numerous, nearly uniform granular residua. The sporozoites are banana-shaped, 6 × 3 μm and each has two different-sized refractile bodies.

Organização estrutural do taquizoíto de toxoplasma gondii: [revisão] / Structural organization of the tachyzoite of toxoplasma gondii: [review]

Objetivos: fazer uma revisão dos aspectos básicos da ultraestrutura do taquizoíto de Toxoplasma gondii, agente etiológico da toxoplasmose. Fonte de dados: os dados apresentados tomam como referência resultados recentes obtidos pelos principais grupos de pesquisadores no mundo, que se dedicam ao estudo do Toxoplasma gondii, incluindo-se dados do próprio grupo de autores. Síntese dos dados: os taquizoítos de Toxoplasma gondii são responsáveis pela fase aguda da infecção, penetrando ativamente, através do complexo apical, em células dos hospedeiros onde se multiplicam. São abordadas características ultraestruturais e moleculares particulares da película, do citoesqueleto, de organelas secretórias (róptrias, micronemas e grânulos densos) e não secretórias (apicoplasto) exclusivas do filo Apicomplexa, além das peculiaridades do núcleo, mitocôndria, acidocalcisomas, retículo endoplasmático e complexo de Golgi desses parasitos intracelulares. Conclusões: estas características confirmam que o sucesso nas etapas de adesão, invasão e multiplicação do parasito possui clara correlação com suas características morfofuncionais.

Aims: To review basic aspects on the ultrastructure of the tachyzoite of Toxoplasma gondii, the causative agent of toxoplasmosis. Source of data: The data presented are based on recent publications by the most distinguished research groups in the area dedicated to the study of Toxoplasma gondii, including studies from the present authors. Summary of findings: The tachyzoites are responsible for the acute phase of the infection by actively penetrating, through the parasites? apical complex, the host cells where they multiply. Both ultrastructural and molecular particularities of the pellicle, the cytoskeleton, secretory (rhoptries, micronemas and dense granules) and non secretory (apicoplast) organelles, specific to Apicomplexa phylum, besides peculiar features of the nucleus, mitochondrion, acidocalcisomes, endoplasmic reticulum and Golgi complex of these intracellular parasites. Conclusions: These characteristics confirm that the success in the process of adhesion, invasion and multiplication of this parasite is clearly correlated to its morphology.

Understanding mechanisms and the role of differentiation in pathogenesis of Toxoplasma gondii: a review

Parasite differentiation from proliferating tachyzoites into latent bradyzoites is central to pathogenesis and transmission of the intracellular protozoan pathogen Toxoplasma gondii. The presence of bradyzoite-containing cysts in human hosts and their subsequent rupture can cause life-threatening recrudescence of acute infection in the immunocompromised and cyst formation in other animals contributes to zoonotic transmission and widespread dissemination of the parasite. In this review, we discuss the evidence showing how the clinically relevant process of bradyzoite differentiation is regulated at both transcriptional and post-transcriptional levels. Specific regulatory factors implicated in modulating bradyzoite differentiation include promoter-based cis-elements, epigenetic modifications and protein translation control through eukaryotic initiation factor -2 (eIF2). In addition to a summary of the current state of knowledge in these areas we discuss the pharmacological ramifications and pose some questions for future research.

What new cell biology findings could bring to therapeutics: is it time for a phenome-project in Toxoplasma gondii?

"If you know the enemy and know yourself, you need not fear the result of a hundred battles. If you know yourself but not the enemy, for every victory gained you will also suffer a defeat" (SunTzu the Art of War, 544-496 BC). Although written for the managing of conflicts and winning clear victories, this basic guideline can be directly transferred to our battle against apicomplexan parasites and how to focus future basic research in order to transfer the gained knowledge to a therapeutic intervention stratey. Over the last two decades the establishment of several key-technologies, by different groups working on Toxoplasma gondii, made this important human pathogen accessible to modern approaches in molecular cell biology. In fact more and more researchers get attracted to this easy accessible model organism to study specific biological questions, unique to apicomplexans. This fascinating, unique biology might provide us with new therapeutic options in our battle against apicomplexan parasites by finding its Achilles' heel. In this article we argue that in the absence of a powerful high throughput technology for the characterisation of essential gene of interests a coordinated effort should be undertaken to convert our knowledge of the genome into one of the phenome.

Toxoplasma gondii in experimentally infected Bos taurus and Bos indicus semen and tissues: [revision] / Toxoplasma gondii em semen e tecidos de Bos taurus and Bos indicus experimentalmente infectados: [revisão]

Eighteen young steers were inoculated with Toxoplasma gondii and randomly distributed into three groups of six animals each: GI, 2.5x10(5) "P" strain oocysts, GII, 5.0x10(6) "RH" strain tachyzoites, and GIII (Control). Clinical, serological and parasitemia exams were realized. Parasite investigation by bioassay and PCR was realized on semen and fragments of skeletal musculature, lymph nodes, brain, retina, spleen, liver, lung, testicle, epididymis and seminal vesicle. Blood and semen samples were collected on days -2, -1, 1, 3, 5, 7, 14 and weekly thereafter, up to postinfection day (PID) 84. The inoculated steers (GI and GII) presented hyperthermia from PID 3 to 16. Antibodies against T. gondii were detected through the indirect fluorescence antibody test (IFAT) on PID 5 (1:16) in both inoculated groups (oocysts and tachyzoites), reaching peaks of 1:4096 on PID 7. Parasitemia outbursts occurred in all infected bovines, principally from PID 7 to 28, independent of the strain and inoculate used. Bioassays revealed the presence of parasites in semen samples of animals infected with oocysts (GI) and tachyzoites (GII) on several experimental days between PID 7 and 84. Tissue parasitism by T. gondii was diagnosed by bioassay and the PCR technique in several organ and tissue fragments. These findings suggest the possibility of sexual transmission of T. gondii in the bovine species.

Dezoito bovinos foram inoculados com Toxoplasma gondii e distribuídos aleatoriamente em três grupos de seis bovinos cada: GI (2,5x10(5) oocistos da cepa "P"), GII (5,0x10(6) taquizoítos da cepa "RH") e GIII (controle). Exames clínicos, sorológicos e parasitêmicos foram realizados. Pesquisas do parasito, por meio da bioprova e pela técnica de Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), foram realizadas no sêmen e em fragmentos de musculatura esquelética, linfonodos, cérebro, retina, baço, fígado, pulmão, testículo, epidídimo e vesícula seminal. Amostras de sangue e sêmen foram colhidas nos dias -2, -1, 1, 3, 5, 7, 14 e, semanalmente, até o 84º dia pós-infecção (DPI). Os bovinos inoculados (GI e GII) apresentaram hipertermia do 3º ao 16º DPI. Anticorpos contra T. gondii foram detectados (IFI) no 5º DPI (1:16), em ambos grupos inoculados (oocistos e taquizoítos), atingindo picos de 1:4096 no 7º DPI. Surtos parasitêmicos ocorreram em todos os bovinos infectados, principalmente do 7º ao 28º DPI, independente da cepa e inóculo utilizados. O bioensaio revelou a presença do parasito em amostras seminais dos bovinos infectados com oocistos (GI) e taquizoítos (GII), em diversas datas experimentais, entre o 7º e 84º DPI. Parasitismo tissular por T. gondii foi diagnosticado por meio da bioprova e pela técnica da PCR, em vários fragmentos de tecidos e/ou órgãos. Os achados sugerem a possibilidade da ocorrência da transmissão sexual do T. gondii na espécie bovina.

Vitamin B1 and B6 in the malaria parasite: requisite or dispensable?

Vitamins are essential compounds mainly involved in acting as enzyme co-factors or in response to oxidative stress. In the last two years it became apparent that apicomplexan parasites are able to generate B vitamers such as vitamin B1 and B6 de novo. The biosynthesis pathways responsible for vitamin generation are considered as drug targets, since both provide a high degree of selectivity due to their absence in the human host. This report updates the current knowledge about vitamin B1 and B6 biosynthesis in malaria and other apicomplexan parasites. Owing to the urgent need for novel antimalarials, the significance of the biosynthesis and salvage of these vitamins is critically discussed in terms of parasite survival and their exploitation for drug development.